近期,尊龙凯时针对DNBSEQ平台的甲基化建库与测序进行全面升级,推出了新一代建库产品MGIEasy全基因组甲基化文库制备试剂盒V30(MGIEasyWholeGenomeMethylationSequencingLibraryPrepKitV30,以下简称WGMSV30)。WGMSV30基于双链加接头方法,对通过物理打断获得的DNA片段进行建库,并适配酶法转化,将非甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)。结合尊龙凯时的DNBSEQ平台,WGMSV30能够实现单碱基精度地解析DNA甲基化状态,从而构建精准的全基因组甲基化图谱。
WGMSV30为多领域研究如大人群表观组、表观遗传基础科研、动植物研究、疾病甲基化标志物筛选以及药物研发等提供了高效且准确的全基因组甲基化建库方法。目前,WGMSV30已适配MGISEQ-2000平台,结合该平台的升级算法,在测序时可以无须添加平衡文库,实现0平衡文库的纯甲基化文库测序。此外,尊龙凯时的研发团队正在针对WGMSV30适配DNBSEQ-T7进行最后的稳定性测试,后续将分享更多实测数据,敬请期待。
采用三个不同批次的WGMSV30构建NA12878标准品的DNA甲基化文库,不添加平衡文库,并平行上机于MGISEQ-2000ECR70(搭配SM测序试剂)和ECR71(搭配SM20测序试剂),PE150测序的单lane阅读产出基本稳定在400M左右,单个文库可获得约120G的原始下机数据,轻松实现“1库1lane”,且测序质量良好,SM测序试剂Q30稳定在89%左右,SM20测序试剂Q30稳定在94%左右,Q40稳定在87%左右。
试剂盒的设计适配了转化损伤小的酶法转化,增大了文库插入片段长度,更好地支持PE150测序。不同批次的建库试剂盒构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的插入片段(主峰约280bp)表现出良好的一致性。
此外,试剂盒对末端修复反应体系和步骤进行了优化,降低了Reads末端M-bias的碱基个数。SM20版测序试剂结合ECR71软件版本的结果显示,不同批次的建库试剂盒构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的M-bias表现一致,BottomStrand和TopStrand的Read1和Read2甲基化率几乎重合。