细胞复苏后状态不佳时,该如何进行调整?以下是一些可能导致细胞复苏不良的原因及相应的解决方案,以便在复苏过程中及时进行调整。
1. 细胞冻存不当
解决方法:可以尝试通过调整细胞状态,增加血清比例,再进行后续传代调控。
2. 自行制备的冻存细胞无活性
解决方法:在制备冻存细胞时,建议使用传代次数较少且处于对数期的细胞;提高冻存密度有助于提升复苏存活率,推荐密度为100~300万细胞/mL。
3. 细胞复苏方法不当
解决方法:复苏过程中应强调“快融”,越快融化,细胞受损伤越小。确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
4. 复苏培养基使用不当
解决方法:确保培养基在使用前已预热,并尽快移除含有冷冻保护剂的培养基,以防止细胞活力下降。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
解决方法:冻存和复苏过程对大多数细胞都有不利影响。避免通过涡旋振荡或用力敲打培养瓶(除非培养昆虫细胞时),也不要进行高速离心处理。
6. 细胞稀释过度
解决方法:为了改善复苏效果,建议将解冻后的细胞高密度接种。
7. 冻存液中保护剂在储存过程中未避光
解决方法:如未避光储存,冻存保护剂可能转变为对细胞有毒的物质;建议重新采备冻存保护剂,进行冻存处理。
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